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臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞分離實(shí)驗(yàn)

 更新時(shí)間:2023-07-14 點(diǎn)擊量:810

 臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(Umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs)是指存在于新生兒臍帶組織中的一種多功能干細(xì)胞,廣泛應(yīng)用于組織工程,細(xì)胞治療和基因治療。 HyCyte®臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞取自滿月自然分娩的胎兒臍帶,傳代擴(kuò)增至第二代凍存。本產(chǎn)品經(jīng)生物安全檢測(cè),無細(xì)菌、真菌、霉菌、支原體和病毒污染,表達(dá)多種人源間質(zhì)干細(xì)胞特異性標(biāo)記,具有良好的增殖和分化潛能,可分化為成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、軟骨細(xì)胞等。

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>

  驗(yàn)證HyCyte®人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基對(duì)于人臍帶華通質(zhì)膠中提取間質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)的能力。人體臍帶橫截面示意圖,臍帶內(nèi)層覆蓋,外層為臍上皮,三個(gè)臍血管嵌在華通質(zhì)膠中。華通質(zhì)膠是一種凝膠狀結(jié)締組織,由富含糖胺聚糖(主要是透明質(zhì)酸)、膠原纖維和肌成纖維細(xì)胞以及偶爾存在的肥大細(xì)胞的細(xì)胞外基質(zhì)組成。華通質(zhì)膠基質(zhì)細(xì)胞在血管周圍附近最為豐富,在血管間華通質(zhì)膠中變少。

臍帶

二、實(shí)驗(yàn)試劑和實(shí)驗(yàn)耗材

試劑:人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基(Cat.No.: UCHX-G101)

間充質(zhì)干細(xì)胞 其他配套試劑均為HyCyte

耗材:T175培養(yǎng)瓶

三、實(shí)驗(yàn)步驟

(1)用無菌輔料鑷從轉(zhuǎn)運(yùn)瓶中取出臍帶,置于1×PBS培養(yǎng)皿中。

(2)清洗臍帶,轉(zhuǎn)移至另一1×PBS培養(yǎng)皿中,重復(fù) 3次。

(3)將臍帶剪成4 cm左右小段,再清洗3次。

(4)去臍帶血管、羊膜,取華通膠。

(5)華通膠轉(zhuǎn)移至1個(gè)50 ml離心管中,剪碎至糜狀。

(6)T175瓶中加入40 ml人臍帶干細(xì)胞培養(yǎng)基。

(7)按每個(gè)T175瓶1 ml組織接種?;靹?,靜置培養(yǎng)。

(8)靜置培養(yǎng)5 d以上,觀察貼壁克隆少,繼續(xù)培養(yǎng)。

(9)培養(yǎng)7 d后,觀察貼壁克隆多,加培養(yǎng)基培養(yǎng)。

(10)培養(yǎng)9 d后,克隆已有較大規(guī)模增殖,繼續(xù)培養(yǎng)。

(11)培養(yǎng)第10天,按1:1傳代于新 T175瓶。同時(shí),組織轉(zhuǎn)移至新T175瓶進(jìn)行二次遷移。

細(xì)胞培養(yǎng)基

實(shí)驗(yàn)總結(jié)

   本次實(shí)驗(yàn)歷時(shí)18天,成功分離培養(yǎng)人臍帶間質(zhì)干細(xì)胞。臍帶組織塊貼壁正常(通常臍帶組織貼壁形成克隆時(shí)間在5-10天)。觀察到貼壁細(xì)胞形態(tài)為長(zhǎng)梭狀,邊緣明亮。在傳代中,P1 代細(xì)胞形態(tài)正常,密度均勻。此后傳代3次,無老化現(xiàn)象。匯合度較高時(shí),細(xì)胞呈明顯漩渦狀極性。本產(chǎn)品可正常提取、培養(yǎng) 臍帶間質(zhì)干細(xì)胞 


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